Topmusicanswers
Количина укупне ДНК у ПЦР -у има значајан утицај на исход ПЦР процедуре. Употреба превише укупне ДНК резултира упакованом ДНК у затвореном простору реакционог суда и може довести до лажног пуњења, па чак и лоше синтезе ДНК због ометане дифузије великих молекула Так полимеразе.
- Колико шаблона треба да додам у ПЦР?
- Може ли превише прајмера инхибирати ПЦР?
- Шта може узроковати неуспех ПЦР реакције?
- Колико је ДНК довољно за ПЦР?
Колико шаблона треба да додам у ПЦР?
Иако би у теорији један молекул шаблона био довољан, знатно веће количине ДНК се обично користе за класичну ПЦР, на пример, до 1 µг геномске ДНК сисара и само 1 пг плазмидне ДНК (1).
Може ли превише прајмера инхибирати ПЦР?
Загађивачи у мешавини дНТП могу довести до непотпуног или погрешног појачања или инхибиције ПЦР -а. Користите висококвалитетне дНТП-ове. Употреба прекомерне концентрације прајмера може повећати шансе да се прајмери неспецифично вежу за нежељена места на шаблону или једно за друго.
Шта може узроковати неуспех ПЦР реакције?
Заборављање само једне компоненте ПЦР реакције, било да се ради о ДНК полимерази, прајмерима или чак шаблонској ДНК, резултираће неуспешном реакцијом. Најједноставније решење је поновити реакцију. ... Ако након тога још увек нема ПЦР производа, велика је вероватноћа да нешто друго омета вашу реакцију.
Колико је ДНК довољно за ПЦР?
У типичној реакцији од 50 µЛ, 1-2 јединице ДНК полимеразе су довољне за амплификацију циљне ДНК. Међутим, можда ће бити потребно прилагодити количине ензима са тешким шаблонима. На пример, када су инхибитори присутни у узорку ДНК, повећање количине ДНК полимеразе може побољшати принос ПЦР -а.
