Topmusicanswers
Уместо тога, услови ПЦР -а ће морати да се оптимизују; узмите у обзир следеће приликом прилагођавања услова ПЦР -а:
- Смањите количину шаблона.
- Повећајте температуру жарења.
- Користите тоуцхдовн ПЦР.
- Смањите број ПЦР циклуса.
- Редизајнирајте прајмере.
- Користите угнежђене почетнике.
- Поново појачајте производ.
- Зашто мој ПЦР не ради?
- Како оптимизирате ПЦР услове?
- Шта узрокује размазивање у ПЦР -у?
- Како знате да ли је ПЦР контаминиран?
Зашто мој ПЦР не ради?
Заборављање само једне компоненте ПЦР реакције, било да се ради о ДНК полимерази, прајмерима или чак шаблонској ДНК, резултираће неуспешном реакцијом. Најједноставније решење је поновити реакцију. ... Ако након тога још увек нема ПЦР производа, велика је вероватноћа да нешто друго омета вашу реакцију.
Како оптимизирате ПЦР услове?
ПЦР услови
- Користите веће температуре денатурације (нпр.г., 98 ° Ц за разлику од 94 ° Ц или 95 ° Ц) како би се омогућила потпуна денатурација шаблона.
- Скратите време жарења за шаблоне богате ГЦ-ом што је могуће краће.
- Користите прајмере са већим Тм (>68 ° Ц), јер до жарења може доћи на вишој температури.
Шта узрокује размазивање у ПЦР -у?
Контаминација ДНК, РНК у узорку ДНК, висока концентрација ДНК у ПЦР реакцији могу изазвати размазивање. ... Размазивање ДНК обично настаје у биљкама због високе концентрације шаблона ДНК.
Како знате да ли је ПЦР контаминиран?
Да бисте проверили да ли је раствор загађен, саставите реакције негативне контроле користећи нове реагенсе за које је познато да нису контаминирани, и свакој реакцији додајте једно од сумњивих раствора. Та реакција показује да су појачани производи који указују на контаминацију доказ да је додани раствор био контаминиран.
