Topmusicanswers
Подесите температуре жарења, јер високе концентрације ПЦР адитива или ко-растварача ослабљују везивање прајмера за мету. Повећајте количину ДНК полимеразе или користите ДНК полимеразе са високом процесивношћу.
...
- Грешке у секвенци на крајевима ПЦР производа.
- Лажно позитивно појачање.
- Ресурси.
- Која су уобичајена решења проблема која се могу јавити у ПЦР -у?
- Зашто мој ПЦР не ради?
- Шта узрокује размазивање ПЦР -а?
- Шта се дешава ако је температура жарења превисока?
Која су уобичајена решења проблема која се могу јавити у ПЦР -у?
Водич за решавање проблема са ПЦР -ом
| Проблем | Узроци |
|---|---|
| Мали или никакав принос ПЦР производа | Температуре жарења и продужавања програма Тхермоцицлер нису оптималне |
| У реакцији недостаје Так полимераза или друга реакциона компонента | |
| Прениска концентрација прајмера | |
| Циљна секвенца није у шаблону ДНК |
Зашто мој ПЦР не ради?
Заборављање само једне компоненте ПЦР реакције, било да се ради о ДНК полимерази, прајмерима или чак шаблонској ДНК, резултираће неуспешном реакцијом. Најједноставније решење је поновити реакцију. ... Ако након тога још увек нема ПЦР производа, велика је вероватноћа да нешто друго омета вашу реакцију.
Шта узрокује размазивање ПЦР -а?
Контаминација ДНК, РНК у узорку ДНК, висока концентрација ДНК у ПЦР реакцији могу изазвати размазивање. ... Размазивање ДНК обично настаје у биљкама због високе концентрације шаблона ДНК.
Шта се дешава ако је температура жарења превисока?
Температура жарења је била превисока
Ако је температура жарења превисока, прајмери се не могу повезати са шаблоном. Опште правило је да се користи температура жарења која је 5 ° Ц нижа од Тм буквара.
