Нема ПЦР појачања

1. Зашто нема амплификације у ПЦР -у?
2. Зашто се моја ДНК није појачала?
3. Шта се дешава ако се прајмери ​​не додају у ПЦР?
4. Како поправити неспецифично појачање у ПЦР -у?

Зашто нема амплификације у ПЦР -у?

Недовољно појачање може настати ако је почетна количина шаблона премала. Повећајте број циклуса појачања у корацима од 5 или, ако је могуће, повећајте количину шаблона. Загађивачи у мешавини дНТП могу довести до непотпуног или погрешног појачања или инхибиције ПЦР -а. Користите висококвалитетне дНТП-ове.

Зашто се моја ДНК није појачала?

1) можда имате лош дизајн прајмера или стандардизацију реакције (Дакле, процените дизајн прајмера и урадите, као што су други већ рекли, градијентну ПЦР за процену различитих температура жарења); 2) Нема ДНК (ваш протокол екстракције је можда пропао), па ваши прајмери ​​могу само да жаре једни друге (или да их амог).

Шта се дешава ако се прајмери ​​не додају у ПЦР?

Питање: Ако сте заборавили да додате прајмере у своју ПЦР реакцију, шта би се догодило и зашто? 1. Ваша реакција би пропала јер Так полимераза не може додати базе без већ присутног малог комада ДНК. ... Ваша реакција би пропала јер не би постојао ензим који би могао додати нове нуклеотидне базе.

Како поправити неспецифично појачање у ПЦР -у?

Користите мање циклуса када је концентрација предлошка висока, а више циклуса када је концентрација предлошка ниска. 2. Време продужења је било предуго: Продужено време продужења може омогућити неспецифично појачање. Генерално, користите продужено време од 1 мин/кб.