Topmusicanswers
- Који проблеми могу настати због ПЦР амплификације?
- Зашто нема амплификације у ПЦР -у?
- Шта узрокује амплификацију у ПЦР -у?
- Шта узрокује неуспех ПЦР -а?
Који проблеми могу настати због ПЦР амплификације?
Многи уобичајени проблеми са ПЦР-ом и РТ-ПЦР-ом идентификовани су током електрофорезе у агарозном гелу производа реакције. Ово укључује одсуство очекиваног продукта амплификације, присуство неспецифичних производа, прекомерно размазивање и присуство траке „прајмерног димера“.
Зашто нема амплификације у ПЦР -у?
Ензим ДНК полимеразе не ради
Ензим ДНК полимеразе је одговоран за продужење везаних прајмера дуж ланаца шаблона ДНК. Ако овај ензим више није толико ефикасан, можда због смрзавања и одмрзавања, корак продужења током ПЦР реакције неће бити потпун, па нећете добити ПЦР производ.
Шта узрокује амплификацију у ПЦР -у?
Основна ПЦР. ПЦР процес је првобитно развијен за појачавање кратких сегмената дужег молекула ДНК (Саики ет ал. 1985). Типична реакција амплификације укључује циљну ДНК, термостабилну ДНК полимеразу, два олигонуклеотидна прајмера, деоксинуклеотид трифосфате (дНТП), реакциони пуфер и магнезијум.
Шта узрокује неуспех ПЦР -а?
Обично прва ствар коју истраживачи ураде је окривити неисправан ензим или реагенс када експеримент не успе, али са ПЦР -ом је то мање вероватно да ће бити узрок неуспеха. Чешће су узрок дубљи унутрашњи проблеми као што су дизајн прајмера, параметри термоциклера или неспецифично везивање за друге секвенце шаблона.
